双酶切法构建重组载体的实验步骤与注意事项

双酶切使用限制性内切酶如EcoRI和BamHI切割载体和插入片段，确保粘性末端互补连接。

连接后，通过T4 DNA连接酶催化，形成重组载体，随后转化至大肠杆菌进行筛选。

注意事项包括酶切缓冲液匹配、避免星活性，并使用琼脂糖凝胶电泳验证片段大小。