敲除细胞系构建是生物制药工业的核心技术，利用CRISPR/Cas9系统精准靶向基因组，实现特定基因功能丧失。通过sgRNA设计和Cas9核酸酶复合物导入，可高效编辑HEK293或CHO细胞系，减少内源干扰，提升产物纯度。
在工业规模应用中，优化构建流程包括电穿孔转染和单细胞克隆筛选，确保敲除效率达90%以上。同时，整合qPCR和Western blot验证，降低批次变异，支持连续发酵生产的高通量需求。
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未来，结合自动化平台和AI辅助设计，将进一步缩短构建周期，推动个性化药物开发。该技术符合GMP标准，确保生物安全性和可重复性。