基因工程中过表达载体的标准构建流程与关键技术

构建过表达载体首先需根据目标基因特性和宿主细胞类型选择强启动子，如CMV、EF1α或UBC启动子。

常用方法包括限制性内切酶酶切连接、Gibson同源重组和Gateway克隆系统，需确保插入片段序列正确无突变。

成功构建后通过瞬时转染、稳定株筛选及Western blot、qPCR等方法验证过表达效率，确保实验可靠性。