shRNA质粒构建标准化步骤：从设计到验证的生物工程指南

首先，设计shRNA序列，使用在线工具预测靶点，避免脱靶效应，然后合成寡核苷酸插入载体如pLKO.1。

其次，进行克隆反应：T4连接酶连接插入片段，转化DH5α大肠杆菌，平板筛选阳性克隆并测序验证。

最后，转染目标细胞验证沉默效率，优化表达水平以满足工业规模基因工程需求。